Az első emeleten található a palota legnagyobb helysége, az „ötszázak terme”, melyben a Mediciek elűzése utáni városi köztársaság idején gyűléseztek. Visszatértük után megbizták Vasarit az ujjáépítéssel, aki 18 méter magasra emelte a mennyezetet. Itt s a falak allegórikus festményein I. Cosimo nagyherceg visszatérése Firenzébe és A Medici-hercegség birtokai, továbbá Pisa és Siena meghódításának története látható. A márvány szoborcsoportok közül kiemelkedik Michelangelo: A szellem legyőzi a nyers erőt  című alkotása.